RFLP: הגדרה ושימושיה בפתרון תעלומות DNA

גבול הגבלת אורך פולימורפיזם (RFLP) היא שיטה מולקולארית של ניתוח גנטי המאפשר לאנשים להיות מזוהים על בסיס דפוסים ייחודיים של חיתוך אנזים הגבלת באזורים ספציפיים של ה- DNA.

המכונה גם ניתוח RFLP, הטכניקה מנצלת את הפולימורפיזם בקודים הגנטיים של אנשים בודדים. למרות שלכל חברי המין יש למעשה את אותו המבנה הגנטי, הבדלים קלים אלה מהווים הבדלים בפנוטיפ, כגון הופעה או חילוף חומרים, בין פרטים.

טכניקות ניתוח RFLP כרוך חיתוך אזור מסוים של ה- DNA עם השתנות ידוע, עם אנזימים הגבלה, ולאחר מכן הפרדת שברי ה- DNA על ידי אלקטרופורזה ג'ל agarose וקביעת מספר שברים וגדלים יחסיים.

אנזים הגבלה הוא אנזים, מולקולת חלבון, אשר חותך DNA באתרי הגבלה. למעשה, דגימת ה- DNA נשברת ומעוכלת על ידי אנזימי ההגבלה. החלקים המתקבלים מופרדים לפי אורכם, והדפוס של גודל החלקים יהיה שונה עבור כל נבדק.

תהליך ה- RFLP המלא דורש תווית בדיקה, פיצול דנ"א, אלקטרופורזה, סופג, הכלאה, כביסה ואוטורדיוגרפיה. RFLP זוהה הוא דמיינו באמצעות סרט רנטגן ב autoradiography, שבו שברי DNA ניתן לצפות ונותחו לאחר שהם מופרדים אחד על השני על ידי אלקטרופורזה.

חלק מן היישומים עבור ניתוח RFLP כוללים:

DNA טביעת אצבע

• מדענים משפטיים עשויים להשתמש בניתוח RFLP כדי לזהות חשודים בהתבסס על עדויות ראיות שנאספו בסצינות של פשעים. אבהות. RFLP משמש גם בקביעת אבהות או מעקב אחר מוצאם.
• גיוון גנטי. הטכניקה יכולה לשמש ללימוד האבולוציה והגירה של חיות בר, לימוד דפוסי גידול באוכלוסיות בעלי חיים ובזיהוי ואבחון של מחלות מסוימות.
• טכניקה של שימוש בזיהוי RFLP של וריאציה בגנום הוא כלי חיוני במיפוי הגנום ובניתוח מחלות גנטיות. אם יבדוק את מיקומו של גן מסוים של מחלה בכרומוזום מסוים, החוקרים ינתחו את הדנ"א של בני משפחה עם המחלה, ואז יחפשו דפוסי ירושה דומים באללים של RFLP. ברגע שגנים של מחלות מתמקדים, ביצוע ניתוח RFLP על בני משפחה אחרים עלול לחשוף מוביל של הגנים המוטנטיים או לסמן את הסיכון הכולל למחלות.

חשוב לציין כי הטכניקה RFLP אינו בשימוש נרחב עכשיו, כי טכניקות חדשות יותר, חזקים יותר משמשים לניתוח דנ"א במדעי משפטים ועוד כמה תחומים.

היבט שלילי של ניתוח

למרבה הצער, הטכניקה ניתוח RFLP הוא מייגע ואיטי. מלבד הדרישה של כמות גדולה של דנ"א מדגם - המדגם יהיה בדרך כלל צריך להיות בערך בגודל של רבע, שהוא גדול יחסית עבור דגימות DNA - התהליך, החל תיוג בדיקה לשטיפה ו autoradiography, יכול לקחת עד חודש מלא כדי להשלים.

תוצאות הפרויקט הגנום האנושי יש די הרבה להחליף את הצורך RFLP. הפרויקט אפשר לקבוע את כל רצף הדנ"א שנמצא בתאים אנושיים, את הגנום האנושי, ואת זיהוי כל הגנים בגנום האנושי.