הגברה DNA באמצעות תגובת שרשרת פולימראז

PCR מייצג את תגובת שרשרת הפולימראז, טכניקת ביולוגיה מולקולרית להגברת מקטעי הדנ"א, על ידי יצירת מספר עותקים באמצעות אנזימים DNA פולימראז בתנאים מבוקרים. כמו עותק יחיד של קטע DNA או גן ניתן לשכפל לתוך מיליוני עותקים, המאפשר זיהוי באמצעות צבעים וטכניקות להדמיה אחרים.

שפותחה בשנת 1983, תהליך PCR אפשרה לבצע רצף דנ"א ולזהות את הסדר של נוקליאוטידים בגנים בודדים.

-> ->

השיטה משתמשת רכיבה תרמית או חימום חוזר וקירור של התגובה עבור ההיתוך דנ"א שכפול. כפי PCR ממשיך, ה- DNA "החדש" משמש כתבנית לשכפול תגובת שרשרת תגרום, הגברה אקספוננציאלית תבנית ה- DNA.

טכניקות PCR מוחלות בתחומים רבים של ביוטכנולוגיה, כולל הנדסת חלבונים, שיבוט, זיהוי פלילי (DNA fingerprinting), בדיקות אבהות, אבחון מחלות תורשתיות ו / או זיהומיות, וכן לניתוח דגימות סביבתיות.

ב פלילי, בפרט, PCR הוא שימושי במיוחד כי זה מגביר אפילו את הכמות הקטנה ביותר של ראיות DNA. PCR יכול לשמש גם כדי לנתח DNA כי הוא בן אלפי שנים, טכניקות אלה שימשו כדי לזהות כל דבר, מ 800, 000 בן ממותה כדי מומיות מרחבי העולם.

הליך PCR הוא כדלקמן:

• אתחול: שלב זה הוא הכרחי רק עבור פולימרים DNA הדורשים ההתחלה PCR. התגובה מחוממת בין 94 ל 96 מעלות צלזיוס מוחזק במשך 1-9 דקות.

• Denaturation: אם ההליך אינו דורש אתחול, denaturation הוא הצעד הראשון. התגובה מחומם ל 94-98 מעלות צלזיוס למשך 20-30 שניות. דפוסי המימן של הדנ"א מתפרקים ומולקולות דנ"א בודדות נוצרות.
• חישול: טמפרטורת התגובה נמוכה יותר בין 50 ל 65 מעלות צלזיוס מוחזק במשך 20-40 שניות. פריימרים anneal לתבנית DNA חד גדילי. הטמפרטורה חשובה ביותר בשלב זה. אם זה חם מדי, אולי לא תחבר את פריימר. אם קר מדי, אולי תחבר את פריימר בצורה לא מושלמת. קשר טוב נוצר כאשר רצף פריימר מקרוב תואם את רצף התבנית.
• הרחבה / הארכה: הטמפרטורה במהלך שלב זה משתנה בהתאם לסוג הפולימראז. פולימראז ה- DNA מסנתז גדיל DNA חדש לגמרי.
• התארכות סופי: שלב זה מבוצע ב 70-74 מעלות צלזיוס למשך 5-15 דקות לאחר מחזור ה- PCR הסופי.
• עצירה סופיים: שלב זה הוא אופציונלי. הטמפרטורה נשמרת על 4-15 מעלות צלזיוס ו strops את התגובה.

הנוהל מחולק לשלושה שלבים:

• הגברה מעריכית: במהלך כל מחזור, המוצר (הדנ"א הספציפי המשוכפל) מוכפל.
• פלוס- off שלב: כמו פולימראז DNA מאבד פעילות וצורכת ריאגנטים, התגובה מאטה.
• רמה: אין עוד מוצר מצטבר.