הכל על אנזימים הגבלה

כמה אתה יודע על אנזימי הגבלה? קבל הבנה טובה יותר של מה שהם עושים ולמה הם חשובים, עם סקירה זו.

הגדרת אנזימי הגבלה

endonucleases הגבלה הן סוג של אנזים שחותכים מולקולות דנ"א. כל אנזים מזהה רצף ייחודי של נוקליאוטידים בחוט ה- DNA. רצפים כאלה הם בדרך כלל על 4 עד 6 זוגות בסיס ארוך. רצפים הם palindromic כי גדיל DNA חינם יש את אותו רצף רק בכיוון ההפוך.

-> ->

במילים אחרות, שתי גדילי הדנ"א נחתכים באותו מיקום.

איפה אנזימים אלה נמצאו

אנזימי הגבלה נמצאים זנים שונים של חיידקים שונים שבהם התפקיד הביולוגי שלהם הוא להשתתף בהגנה על התא. אנזימים אלה "מגבילים" זר (ד) נגיפי DNA הנכנס לתא, על ידי השמדתו. לתא המארח יש מערכת של הגבלה-שינוי, המתיללת את ה- DNA שלו באתרים ספציפיים עבור אנזימי ההגבלות המתאימים, ובכך מגינה עליו מפני מחשוף. יותר מ -800 אנזימים ידועים התגלו כי לזהות יותר מ 100 רצפים נוקליאוטידים שונים.

-> ->

השתמש בביוטכנולוגיה

אנזימי הגבלה משמשים ביוטכנולוגיה כדי לחתוך DNA לתוך גדילים קטנים יותר כדי ללמוד הבדלים אורך השבר בין אנשים (הגבלת קטע אורך פולימופיזם - RFLP). הם משמשים גם שיבוט גנים.

טכניקות RFLP נעשה שימוש כדי לקבוע כי יחידים או קבוצות של אנשים יש הבדלים ייחודיים רצפי גנים דפוסי הגבלת הגבלת באזורים מסוימים של הגנום.

הידע של תחומים ייחודיים אלה הוא הבסיס טביעת אצבע DNA. כל אחת משיטות אלה תלויה בשימוש של ג'ל אלקטרופורזה agarose ההפרדה של שברי ה- DNA. חיץ TBE, אשר מורכב בסיס Tris, חומצת בור, EDTA, נפוץ עבור agarose ג'ל אלקטרופורזה לבחון מוצרי DNA.

סוגי אנזימים הגבלה

ישנם שלושה סוגים שונים של אנזימים הגבלה. סוג אני חותך DNA במקומות אקראיים עד 1000 או יותר בסיס זוגות מאתר ההכרה. סוג III חתכים על כ 25 זוגות מהאתר. סוגי I ו- III דורשים ATP ועשויים להיות אנזימים גדולים עם מספר תת יחידות. אנזימים מסוג II, המשמשים בעיקר בביוטכנולוגיה, חותכים DNA בתוך הרצף המוכר ללא צורך ב- ATP והם קטנים ופשוטים יותר.

אנזימי הגבלה מסוג II נקראים על פי המין החיידקי שממנו הם מבודדים. לדוגמה, EcoRI האנזים היה מבודד מ E. coli . רוב הציבור מכיר את E. coli פרוצים במזון.

סוג II אנזימים הגבלה יכול ליצור שני סוגים שונים של חתכים תלוי אם הם לחתוך שתי גדילים במרכז רצף הכרה או כל קווצה קרוב יותר לקצה אחד של רצף הכרה.

לחתוך לשעבר יפיק "קצוות בוטים" עם שום overhangs נוקליאוטידים. זה האחרון מייצר "דביק" או "מלוכדת" מסתיים כי כל קטע וכתוצאה מכך של DNA יש overhang כי מחמאות את שברים אחרים. שניהם שימושיים בגנטיקה מולקולרית להכנת DNA וחלבון רקומביננטיים.

צורה זו של דנ"א בולטת כי היא מיוצרת על ידי קשירת (מליטה יחד) של שני או יותר גדילים שונים שלא היו מקושרים במקור יחד.