חשיבות פעילות ספציפית בבידוד חלבונים

פעילות ספציפית היא מונח המשמש למדידת קצב התגובה של אנזים עם מצע.

פעילות אנזים ספציפית (פעילות ספציפית לקיצור) היא מדד טוהר האנזים ומצוטט ביחידות / מ"ג . הערך הופך להיות גדול יותר, כאשר הכנת האנזים נעשית טהורה יותר, שכן כמות החלבון (mg) בדרך כלל נמוכה יותר, אך קצב התגובה נשאר זהה (או עשוי לעלות עקב הפרעה מופחתת או הסרת מעכבים).

-> ->

פעילות ספציפית: מדידת אנזימים קינטיקה

כמו קצת רקע, אנזימים הם חלבונים הפועלים כזרזים בהפחתת כמות של אנרגיה ההפעלה עבור התגובה להתרחש. אנרגיה ההפעלה היא האנרגיה הנדרשת כדי לקבל תגובות "התחיל" מאז תגובות רבות לא מתרחשות מהר מאוד (או להתרחש בכלל) אם הם תרמודינמית אפשרי.

->>

אנזימים מזרזים תגובות ספציפיות באתר מסוים (הידוע כאתר הפעיל), שבו המגיבים נקשרים ומגיבים ליצירת המוצרים. מצעים יש אתרים פעילים ספציפיים רק להם, כך שאף חומרים אחרים לא להיקשר או להגיב באותו אתר. כמו מנעול ומפתח, כל אנזים יזרז רק תגובה אחת ספציפית (עם כמה חריגים).

פעילות ספציפית משמשת שיטות בידוד חלבון כדי לציין את אחוז הטיהור. חשוב לדעת את היחידה בעת רכישת אנזימים כדי לציין בדיוק כמה אנזים טהור אתה מקבל.

כאשר מודדים את קינטיקת האנזים (שיעור התגובה של אנזים עם מצע - או משטח), פעילות ספציפית מוגדרת כסכום המצע האנזים הממיר (תגובות מזוקקות), לכל מ"ג בהכנה האנזים, ליחידת זמן.

הפעילות הספציפית של האנזים המבודד נמדדה בחלבון 150 מ"ל / מ"ג לפני הטיהור ו -800 אמולס / דק / מ"ג, לאחר טיהור.

פעילות ספציפית היא מדד חשוב של טוהר האנזים. לקבוצות שונות של אנזים טהור יש את אותם ערכים ואפילו דילול של תמיסת אנזים פעמים רבות יהיו ערכי פעילות ספציפיים זהים למרות שיהיו ערכי פעילות אנזים שונים. זאת משום שבחישוב פעילות ספציפית, המונה (יחידות / מ"ל) ומכנה (mg / ml) מושפעות באופן שווה.

• פעילות ספציפית שונה מאוד מפעילות, אך חישוב הפעילות הספציפית תלוי עדיין בערך הפעילות. משמעות הדבר היא שערך הפעילות הספציפי יהיה תלוי גם בהגדרת יחידת האנזים.

קבוצות של אנזימים בעלי ערך פעילות מסוים נמוך מהצפוי, עשויים להכיל מולקולות אנזים שהשתנו או היו מעורבות עם טומאה.

גורמים המשפיעים על פעילות האנזים

ייתכן כי לאנזים אחד יש ערכי פעילות נמדדים שונים כאשר הם נמדדים במעבדות שונות (כלומר, הבדלים אמיתיים בפעילות הנמדדת, לא הבדלים ניכרים שנגרמים על ידי שימוש בהגדרות יחידה שונות).

הדרך assay מבוצע (שיטת בדיקה כדי לקבוע את טוהר האנזימים) ישפיע על ערכי הפעילות המדווחים. לדוגמה, אנזימים בדרך כלל פעילים יותר בין טמפרטורות של 37 מעלות צלזיוס לעומת 20 מעלות צלזיוס, כך שאם assay מבוצע ב 21 מעלות צלזיוס, הערכים יהיו שונים מן מבחני שנערך בטמפרטורה של 32 מעלות צלזיוס (בדרך כלל , מבחני מתבצעים בטמפרטורה בין 20-37 מעלות צלזיוס).

לכן, ההגדרה של יחידת האנזים תתבטא טוב יותר כ: 1 יחידה (U) היא כמות האנזים המזרז את התגובה של 1 nmol של המצע לדקה בתנאים סטנדרטיים.