כיצד ליצור מאגר TBE בשלושה שלבים פשוטים

חיץ TBE הוא פתרון חיץ המורכב מבסיס Tris, חומצת בור ו- EDTA (או Tris-borate-EDTA בסך הכל). מאגר זה משמש לעתים קרובות עבור ג'ל אלקטרופורזה agarose בניתוח של מוצרי ה- DNA הנובע הגברה PCR, פרוטוקולי טיהור DNA או ניסויים שיבוט DNA.

חיץ TBE הוא שימושי במיוחד עבור הפרדה של שברי DNA קטנים יותר (MW <1000), כגון מוצרים קטנים של מעכבי אנזים הגבלה.

TBE יש קיבולת אחסון גדול יותר ייתן רזולוציה חדה יותר חיץ TAE. חיץ TAE הוא פתרון המורכב בסיס Tris, חומצה אצטית EDTA (Tris-acetate-EDTA).

TBE הוא בדרך כלל יקר יותר מאשר TAE ו מעכבת DNA ligase, אשר עלול לגרום לבעיות אם טיהור DNA הבאים צעדים קשירה נועדו. עם שלושת השלבים הפשוטים הבאים, ללמוד כיצד להפוך חיץ TBE. זה לא צריך לקחת יותר מ 30 דקות כדי ליצור מאגר זה. כך:

-> ->

הכן פתרון צילומים של EDTA

פתרון EDTA (ethylenediamine tetraacetic acid) צריך להיות מוכן מראש. EDTA לא ילך לחלוטין לתוך הפתרון עד ה- pH מותאם עד כ 0. 0. עבור פתרון מלאי 500 מיליליטר של 0. 5 M EDTA, לשקול את 93. 05 גרם של מלח EDTA דיסודיום (FW = 372 2). ואז לפזר אותו 400 מ"ל מים deionized ולהתאים את ה- pH עם NaOH. לאחר מכן, למעלה את הפתרון נפח סופי של 500 milliliters.

-> >

הכנת פתרון מלאי של TBE

הפוך פתרון מרוכז (5x) מלאי של TBE על ידי שקילה 54 גרם בסיס Tris (FW = 121. 14) ו 27. 5 גרם חומצת בור (FW = 61. 83) ו המסת הן כ 900 מיליליטר של מים deionized. לאחר מכן הוסף 20 milliliters של 0. 5 M EDTA (pH 8. 0) ולהתאים את הפתרון נפח סופי של 1 ליטר.

פתרון זה יכול להיות מאוחסן בטמפרטורת החדר אבל משקע ייווצר בפתרונות ישנים יותר. אחסן את המאגר בבקבוקי זכוכית וזורקים אם משקע נוצר.

הכן פתרון עבודה של TBE

עבור agarose ג'ל אלקטרופורזה, חיץ TBE ניתן להשתמש בריכוז של 0. 5x (1: 10 דילול של מלאי מרוכז). לדלל את פתרון המניות על ידי 10x במים deionized. ריכוז סופי המומס הם 45 מ"מ טריס- borate ו 1 מ"מ EDTA. המאגר הוא כעת מוכן לשימוש בניהול agarose ג'ל.

מה שאתה צריך

כדי להפוך חיץ TBE, תצטרך רק ארבעה חומרים. שאר הפריטים ברשימה זו הם ציוד. ארבעת החומרים הנדרשים הם מלח EDTA דיסודיום, בסיס Tris, חומצה בורית ומים deionized.

לגבי ציוד, תצטרך מטר pH ו סטנדרטים כיול, לפי הצורך. בנוסף לכך, תצטרך 600-milliliter ו 1500-milliliter כוסות או צלוחיות. לעגל את צרכי הציוד הם בוגר צילינדרים ומערבבים בארים ומערבבים צלחות.

בדוק את המלאי במעבדה שבה תשתמש כדי לוודא שיש לך את כל מה שאתה צריך לפני שתתחיל. שום דבר לא יותר גרוע מאשר להפסיק באמצע של הכנת פתרון, כי אתה כבר נגמרו של החומרים הנכונים.

אם המעבדה שלך היא בבית הספר או באתר העבודה שלך, לבדוק עם צוות ראוי לראות שיש להם את כל הפריטים במלאי. פעולה זו עשויה לחסוך לך זמן ואנרגיה בסופו של דבר.